楊永花

(蘭州市園林科學(xué)研究所730070)

垂吊矮牽牛(Petunia—Spreding)為茄科矮牽牛屬的多年生蔓生植物，是近年來(lái)較為時(shí)尚的垂吊型花卉裝飾植物。目前該品系主要依靠從國外引進(jìn)F1代種子進(jìn)行播種繁殖，但種子價(jià)格昂貴(單價(jià)2.5元/粒)，細小，播種難度大，種子繁殖又易發(fā)生變異，出現雜色，而扦插繁殖苗分枝力弱，株型單薄，嚴重影響其觀(guān)賞價(jià)值。播種、扦插都難以在短時(shí)間內生產(chǎn)出批量的優(yōu)質(zhì)種苗。因此，采用組織培養技術(shù)進(jìn)行快速繁殖，可解決繁殖系數低、種子價(jià)格昂貴等問(wèn)題，從而滿(mǎn)足市場(chǎng)的大量要求。

　　一、材料與方法

　　1��取材與消毒
　　在日光溫室中選擇生長(cháng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害植株的幼嫩葉片，作為外植體材料，用自來(lái)水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗2～3次，置于超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡10秒鐘，無(wú)菌水沖洗一次，再用1‰的升汞消毒5～6分鐘，無(wú)菌水沖洗4～5次，待接種。
　　2��培養基及培養條件(培養基單位mg/L)
　　試驗所選用的培養基為(1)MS+6BA1+NAA0.1；(2)MS+6BA2+NAA0.2；(3)MS+6BA0.5+NAA0.1；(4)MS+KT0.5+NAA0.1；(5)1/2MS；(6)1/2MS+IBA0.1；(7)1/2MS+IBA0.2；(8)1/2MS+NAA0.03。以上培養基中均加入瓊脂3.3g/L，MS中加入白糖30g/L，1/2MS中加入白糖20g/L，pH值均為5.8，培養溫度(25±2)℃，光照強度1500LX～2000LX，光照時(shí)間10～12h/d。
　　3��實(shí)驗方法
　　將葉片剪成1cm2大小的方塊，接種在培養基(1)和(2)中，誘導愈傷組織及不定芽的形成。每處理10塊葉片，待外植體萌發(fā)產(chǎn)生密集的不定芽叢后，分割成1cm2大小的方塊，繼代培養在(3)和(4)中，每處理接20塊不定芽叢。培養10天后統計高于2cm的健壯幼苗，并將高于2cm的健壯幼苗剪切下來(lái)轉接到(5)～(8)中進(jìn)行生根，每處理接40棵幼苗，培養一周后統計幼苗生根情況。當生根試苗根系生長(cháng)至1cm以上，苗高4～5cm時(shí)進(jìn)行移栽。

　　二、試驗結果

　　1��芽誘導分化
　　接種到培養基(2)中的葉片，培養1周后，葉片邊緣開(kāi)始出現淡綠色愈傷組織，葉片漸變厚并彎曲成拱形狀，2周后愈傷組織上出現綠色突起(即芽點(diǎn))，3周開(kāi)始分化，產(chǎn)生密集的叢生芽，誘導率達100%。接種到培養基(1)中的葉片培養10天后，葉片邊緣開(kāi)始出現淺綠色愈傷組織，葉片加厚，并膨大凸起。3周后愈傷組織上出現稀少的綠色芽點(diǎn)，1個(gè)月后開(kāi)始分化產(chǎn)生叢生芽，誘導率達90%。葉片在培養基(2)中比(1)中分化所需時(shí)間短，分化率高，且產(chǎn)生密集的叢生芽。因此，MS+6BA2+NAA0.2更適宜葉片誘導培養。
　　2��芽的增殖繼代
　　繼代于(3)中的葉片不定芽叢培養10天后，每塊不定芽可增殖15～20個(gè)高于2cm的幼苗，但幼苗莖桿細弱，需經(jīng)過(guò)壯苗培養才能轉接到生根培養基中進(jìn)行生根。繼代于(4)中的不定芽叢培養10天后，每塊不定芽均可增殖30～40個(gè)高于2cm的幼苗，且幼苗莖桿粗壯，葉片濃綠，生長(cháng)勢強，可直接轉接到生根培養基中進(jìn)行生根。因此，MS+KT0.5+NAA0.1是叢生芽增殖的最佳繼代培養基。
　　3��生根培養
　　健壯幼苗在生根培養基(5)和(6)中，培養5天后開(kāi)始生根，培養10天后，(5)中幼苗根細弱，每株平均有12條根，部分幼苗葉尖變白，(6)中幼苗根粗壯，平均有20條根，幼苗生長(cháng)旺盛，(7)中幼苗7天開(kāi)始生根，根粗短，平均只有9條根，(8)中幼苗8天開(kāi)始生根，根粗短，平均有16條根，幼苗生長(cháng)健壯。因此，從開(kāi)始生根天數、平均根數及幼苗生長(cháng)勢看，1/2MS+IBA0.1為幼苗最佳生根培養基，根多而粗壯。

　　三、煉苗與移栽
　　生根苗根系長(cháng)至1cm以上，株高4～5cm時(shí)即可進(jìn)行煉苗移栽。移栽前先在自然條件下打開(kāi)瓶口煉苗2～3天，輕取試管苗，用溫水洗干凈根部粘附的培養基，移栽到新的蛭石基質(zhì)中，用1‰的多菌靈溶液澆濕基質(zhì)，用75%的遮蔭網(wǎng)遮蔭保濕，1周后逐漸通風(fēng)透光，生長(cháng)適溫控制在22℃左右。

　　四、小結與討論
　　1��通過(guò)組織培養技術(shù)可快速生產(chǎn)出垂吊矮牽牛幼苗，解決了其種子依靠進(jìn)口等問(wèn)題，降低了生產(chǎn)成本，為大規模商業(yè)化生產(chǎn)種苗提供了一條捷徑。生產(chǎn)的植株分植習性好，葉片濃綠，花色鮮艷，花期長(cháng)。
　　2��在實(shí)驗范圍內，垂吊矮牽牛葉片誘導愈傷組織形成叢生芽的最佳培養基為MS+6BA2+NAA0.2，最佳增殖繼代培養基為MS+KT0.5+NAA0.1，最佳生根培養基為1/2MS+IBA0.1。
　　3��生根試管苗根系長(cháng)至1cm以上，株高4～5cm時(shí)即可煉苗移植，移栽成活率達95%以上。